2021-11-08 12:20:09
1.砂保存方法。河沙加入10%稀盐酸，煮沸30分钟去除有机物。倒入酸水，用自来水冲洗至中性。干燥后过40目筛，除去粗颗粒备用。此外，对免耕层中不含腐殖质的贫黄土或红土，用自来水浸泡冲洗数次，直至呈中性。干燥，粉碎，过100目筛，除去粗颗粒。
2.滤纸保存法。将滤纸切成0.51.2厘米的小条，放入0.68厘米的安瓿中，每管1-2片，用棉塞塞住，1.05公斤/厘米，121灭菌30分钟。需要保存的菌株在合适的斜面培养基上培养，使其充分生长。将1-2ml灭菌脱脂牛奶滴入灭菌培养皿或试管中，取几圈菌苔，在牛奶中混合均匀，制成浓悬液。用无菌镊子从安瓿管中取出滤纸条，浸入菌悬液中使其充分吸收，然后放回安瓿管中，用棉塞塞住。将安瓿管放入以五氧化二磷为吸水剂的干燥器中，用真空泵抽干。将棉花插入管内，按照图VII-13用火焰熔合密封，低温保存。如果需要应变，可以在火焰上加热安瓿嘴，在加热的部位滴一滴冷水打碎玻璃，然后用镊子将嘴端的玻璃敲掉。安瓿管打开后，可取出滤纸，放入液体培养基中，在培养箱中培养。用这种方法可以保存细菌、酵母和丝状真菌。前两种可以保存2年左右，有些丝状真菌甚至可以保存14-17年。与液氮冷冻干燥法相比，该方法更简单，不需要特殊设备。
3.宿主保存方法。宿主保存法用于不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次体、螺旋体等。它们必须在活的动物、昆虫和鸡胚中被感染和传代。这种方法相当于一般微生物的传代培养保存方法。病毒和其他微生物也可以通过其他方法保存，如液氮保存和冷冻干燥保存。冷冻保存方法可分为低温冰箱(-20-30、-50-80)、干冰酒精速冻(约-70)和液氮速冻(-196)，其中甘油管冷冻法是最常见的方法。
4.甘油管保存法。甘油冷冻保存法是利用甘油中微生物的生长和代谢受到抑制的原理来达到保存的目的。方法是用高压蒸汽将80%甘油灭菌备用。将培养的斜面菌种用无菌水制成高浓度菌悬液。将1毫升灭菌甘油放入菌液中充分混合，使甘油浓度约为10%-30%，并在-70冷冻。在-20下储存时间短。或者用体积比为8: 2的甘油-生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀，放入-20的冰箱中保存。这种方法适用于一般细菌的保存，也适用于链球菌、弧菌、真菌等细菌。需要用特殊的方法保存。它适用范围广，操作简单，效果好，无变异。甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，可能是由于添加生理盐水适当降低甘油的高渗作用，肉汤培养适当增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌种。
5.冷冻干燥保存法。首先将微生物在极低温(约-70)下快速冷冻，然后减压升华(真空干燥)除去水分，其中真空冷冻干燥是最常见的方法。冷冻干燥保存方法是菌种低温保存、干燥和脱氧的主要因素。除丝状真菌菌丝体外，适用于病毒、细菌、放线菌、酵母、丝状孢子等各类微生物，不适合冷冻干燥保存的微生物不到2%。冷冻干燥法是将细胞在低温下快速冷冻，然后在真空中干燥，以停止微生物的生长和酶的活性。为了防止冷冻和水升华过程中对细胞的损伤，细胞悬液应配以保护剂，使细菌的溶质在冷冻和脱水过程中发挥保护作用，通过氢键和离子键对水和细胞的亲和力稳定细胞成分的构型。即样品中的水处于冻结状态，通过抽真空和减压，将冻结的冰直接升华为水蒸气，使样品干燥。将干燥后的微生物真空密封，与空气隔离，达到长期保存的目的。
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